ПЦР в реальном времени / Д. В. Ребриков [и др.] ; ред. Д. В. Ребриков. - 6-е изд. - Москва : БИНОМ. Лаборатория знаний, 2014. - 223 с. : рис., табл. - Предм. указ.: с. 216-223. - ISBN 978-5-9963-1898-8 : 168000 р. Содержание: ЧТО ТАКОЕ ПЦР . - С .10 Изобретение ПЦР . - С .10-12 Изобретение ПЦР "в реальном времени" . - С .12-13 Отличие анализа продуктов ПЦР "по конечной точке" и "в реальном времени" . - С .14 Развитие ПЦР "в реальном времени" как диагностического инструмента . - С .14-18 ОСНОВЫ ПОЛИМЕРАЗНОЙ ЦЕПНОЙ РЕАКЦИИ . - С .19 Общие сведения о ПЦР . - С .19-20 Организация ПЦР-лаборатории . - С .20-22 Оборудование и материалы для ПЦР . - С .22-25 Свойства олигонуклеотидов (праймеров и проб) . - С .26-29 Влияние ионов Mg2+ . - С .29 Свободные дезоксирибонуклеотидтрифосфаты (dNTPs) . - С .29-30 Влияние рН . - С .30 Минеральное масло . - С .30 Другие компоненты, добавление которых влияет на ПЦР . - С .30 Ферменты, используемые в ПЦР . - С .31-32 Программы амплификации . - С .32-36 "Горячий старт" (hot start) . - С .36-38 ОБОРУДОВАНИЕ ДЛЯ ПЦР "В РЕАЛЬНОМ ВРЕМЕНИ" . - С .39 Устройство детектирующих амплификаторов . - С .39 Основные функциональные узлы . - С .39-52 Обзор характерных разновидностей приборов . - С .52-63 Тенденции развития оборудования для ПЦР "в реальном времени" . - С .64 ВИЗУАЛИЗАЦИЯ НАКОПЛЕНИЯ ДНК ПРИ ПРОВЕДЕНИИ ПЦР "В РЕАЛЬНОМ ВРЕМЕНИ" . - С .65 Флуоресценция . - С .65-66 Флуорофоры . - С .66-69 Гасители флуоресценции . - С .69-73 Неспецифичные системы детекции . - С .73-76 Специфичные системы детекции . - С .76-84 ДИЗАЙН ПРАЙМЕРОВ И ПРОБ, ПРОГРАММЫ АМПЛИФИКАЦИИ . - С .85 Параметры, влияющие на взаимодействие олигонуклеотида и ДНК . - С .85-94 Выбор последовательности проб . - С .94-95 Программное обеспечение для дизайна праймеров и проб . - С .95-96 Особенности систем праймеры-проба . - С .96 Особенности программ амплификации для ПЦР "в реальном времени" . - С .96-100 ОСОБЕННОСТИ ОЧИСТКИ НУКЛЕИНОВЫХ КИСЛОТ ДЛЯ ПЦР "В РЕАЛЬНОМ ВРЕМЕНИ" . - С .101 Общие принципы очистки нуклеиновых кислот для использования в ПЦР . - С .101-103 Особенности взятия биоматериала для клинических ПЦР-исследований и риск контаминации . - С .103-105 Особенности методов очистки НК для ПЦР "в реальном времени" . - С .105-106 Типовые ошибки использования ПЦР "в реальном времени", связанные с количеством нуклеиновых кислот, забираемых в реакцию . - С .106-108 АНАЛИЗ ДАННЫХ ПЦР "В РЕАЛЬНОМ ВРЕМЕНИ" . - С .109 Методы и средства анализа графиков накопления ДНК . - С .109-111 Простая модель ПЦР . - С .111-112 Связь флуоресцентного сигнала и накопления ДНК в ходе ПЦР . - С .113-114 Пороговый метод сравнения графиков накопления ДНК (Ct) . - С .114-118 Определение эффективности ПЦР . - С .118-122 Недостатки порогового метода и пути их преодоления . - С .122-129 Методы прямого сравнения графиков накопления ДНК (Cp) . - С .129-134 Комбинация методов Ct и Ср . - С .134-140 ОПРЕДЕЛЕНИЕ УРОВНЯ ПРЕДСТАВЛЕННОСТИ ТРАНСКРИПТОВ . - С .141 Организация эксперимента . - С .141-151 Абсолютное определение уровня представленности транскриптов . - С .151-155 Относительное определение уровня представленности транскриптов . - С .155-156 Нормировка данных . - С .156-160 Внутренний контрольный образец . - С .160-161 Отрицательный контрольный образец . - С .161-164 КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ВИРУСНОЙ НАГРУЗКИ . - С .165 Количественное определение вирусной нагрузки . - С .165-182 Источники погрешностей и варианты учета потерь и эффективности реакции . - С .182-187 ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ПЦР "В РЕАЛЬНОМ ВРЕМЕНИ" ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ОДНОНУКЛЕОТИДНОГО ПОЛИМОРФИЗМА . - С .188 Однонуклеотидный полиморфизм последовательностей ДНК . - С .188-190 Идентификация ОНП с помощью аллель-специфичных праймеров . - С .190-196 Дифференциация аллелей с помощью олигонуклеотидных проб . - С .196-198 Генотипирование ОНП методом плавления ДНК-дуплексов . - С .199-201 ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОТНОСИТЕЛЬНОГО СОДЕРЖАНИЯ НУКЛЕИНОВЫХ КИСЛОТ НА ПРИМЕРЕ ГЕНЕТИЧЕСКИ МОДИФИЦИРОВАННЫХ ИСТОЧНИКОВ . - С .202 Общие сведения о ГМИ . - С .202 Классификация существующих методов определения ГМИ в продуктах питания . - С .202-205 Организация чужеродной ДНК в геноме растений . - С .205 Выбор последовательностей-мишеней для выявления чужеродной ДНК в геноме растения . - С .205-207 Тест-системы для определения процентного содержания чужеродной ДНК относительно геномной ДНК растений . - С .207-210 Выбор чужеродной и нормированной ДНК для количественного определения ГМИ . - С .210-211 Калибровочные образцы . - С .211-212 Точность метода определения процентного содержания генетически модифицированных ингредиентов в пище с помощью метода ПЦР "в реальном времени" . - С .212-215
Кл.слова (ненормированные): PCR -- МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ -- ОБОРУДОВАНИЕ -- АНАЛИЗ ДАННЫХ Аннотация: Рассмотрены различные варианты и особенности оборудования для проведения ПЦР "в реальном времени", даны рекомендации по выбору амплификатора. Разобраны особенности систем флуоресцентной регистрации накопления ДНК. Рассмотрены ключевые факторы, определяющие выбор последовательности олигонуклеотидов и параметры программ амплификации. Уделено внимание подготовке проб и особенностям анализа получаемых данных, что необходимо для получения наиболее достоверных результатов. Отдельные главы посвящены применению ПЦР "в реальном времени" для решения различных задач: определения уровня представленности транскриптов, вирусной нагрузки, нуклеотидного полиморфизма, относительного содержания нуклеиновых кислот на примере ГМО. Доп.точки доступа: Ребриков, Д. В.; Саматов, Г. А.; Трофимов, Д. Ю.; Семенов, П. А.; Савилова, А. М.; Кофиади, И. А.; Абрамов, Д. Д.; Ребриков, Д. В. \ред.\ Экземпляры всего: 1 ОКД/57/610908 (1) Свободны: ОКД/57/610908 (1) |